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PCR儀器的種類有哪些,如何選擇?

PCR儀器的類型

分類總是多種多樣的。壹般來說可以分為兩類:PCR擴增儀和實時熒光PCR儀。也有人稱之為半自動和全自動,或者定性和定量,這些都是不準確的名稱。

PCR最重要的是升溫和降溫的過程。原來的水浴PCR是三個水浴箱和壹個機械臂,定期取出反應罐換成水浴鍋。這玩意體積大,又快又慢,但其實結果並不比後來的PCR儀差,我現在很欣賞。後來有人用制冷加熱的方法,做了壹個固定升降溫的PCR擴增儀。

後來隨著定量技術的發展,壹些公司將擴增儀與檢測集成在壹起,成為所謂的自動(或定量)PCR儀。當然,標準叫實時熒光定量PCR儀。

品牌

壹切都有品牌。現在國內外有很多品牌的PCR儀。就國外而言,比較著名的有:

ABI美國應用生物公司:老牌生物公司貴族,買的是原裝PE,PE公司是PCR的鼻祖,有很多經典的PCR儀器,包括5700(停產)、7700(停產)、7000、7900等實時熒光定量PCR儀器。

羅氏羅氏的診斷:炙手可熱的新貴LIGHTCYCLER是其唯壹的PCR儀器。市場做的很好,以科研為主。不過國內很多醫院都在用。它是最獨特的PCR儀器,具有獨特的離心、氣體加熱和毛細管設計。當然質量是另壹回事,所以其獨特的技術能力和膽識是值得敬佩的。

MJ:壹個剛剛進入中國的名人,MJ的放大器在生命科學研究領域很有名氣,產品比較適合高通定量檢測,廣泛應用於人類基因組計劃。實際上,實時熒光PCR儀剛剛進入中國,它的特點是能夠利用井間不同的溫度。這個其實更有用。

伯樂:啊,便宜的麥當勞,ICYCLER是它的主打產品。在中國已經很久了。產品和5700壹樣,是在放大器上增加了壹個定量模塊,特點是價格更低。

國內也有很多項目,如杭州博裏、杭州姬閬、上海風鈴、廈門安普利等。

選擇和購買

準確的說是沒有自動加樣和樣品處理系統,包括實時熒光定量,只能算是半自動。PCR儀就是壹個簡單的東西,壹個溫控裝置,壹個檢測裝置。

關於溫度控制,主要是介質問題。理想的介質是導熱性好、比熱大、接觸緊密的東西。

這方面最好的是水浴和油浴,它們比熱高(油大於水),物體溶劑化,與反應物接觸無縫,效果當然最好。但自動化和小型化難度較大,僅采用最初的水浴鍋式。

矽加熱,是最常用的壹種,具有易自動化、速度快、直接加熱冷卻、效果好等優點,但首次成本高。其次,使用的介質是金屬,導熱性能好,但很難與反應管無縫接觸。定性的時候可以加油,但是可以用熒光設定溫度,因為油有熒光信號,所以不能用。所以在無縫接觸中更差。再次,因為是底部加熱,下部壓力大,可能會溢出,但新儀器加熱蓋子後解決了這個問題。

空氣加熱,以空氣為介質,具有與反應體系無縫接觸的優點,但空氣有導熱性能差、比熱小的明顯弱點。所以空氣加熱要利用離心產生氣流,增強導熱性,同時利用毛細管,增加接觸面積,微量試劑來彌補。這樣做了之後,效果還是不錯的。但是有些廠家大談離心和毛細管的優點,卻閉口不談氣體加熱的弱點,這是壹種巧妙的市場手法。同時,離心的使用對標本量的增加有影響,標本量越大,空氣比熱低的弱點越明顯,所以空氣加熱的儀器標本量相對較少。使用毛細管後,反應液與管的接觸面積增大,吸附現象更大。因此,試劑的通用性差,成本高。雖然試劑用量少,但因為是特殊試劑,所以每種試劑都是按實際用量計算,不節約試劑。但是增加了毛細管成本。

關於功能,所有的PCR儀基本都是壹樣的。唯壹的是只有MJ孔可以使用不同的溫度,這對於同時檢測多個項目和調整循環參數是有用的。但實時熒光儀剛剛進入中國,具體情況還不得而知。

關於購買,要看公司的情況。因為PCR的技術含量其實不高,好的國產儀器比如杭州博日(和日本著名廠商大和有關)也不算太差。至於進口儀器,羅氏的儀器不錯,但是如果標本數量多,建議不要用羅氏。壹個會筋疲力盡。此外,每個樣本共享的標準曲線和對照的成本太高。同時,試劑也是有限的。